Indice de HCl (Glories)

 

A 10 ml de vino se le añaden 15 ml de HCl (12 N) y 5 ml de agua

Se diluye 1:30 con agua y se determina la A280 (Do), en una cubeta de cuarzo de 10 mm.

Se deja en reposo durante 7 horas y se centrifuga y se determina de nuevo la A280 (D1)

 

IHCl=[(D0-D1)/D0]* 100

 

 

Indice de gelatina (Glories)

 

A 50 ml de vino se le añaden 5 ml de solucion de gelatina (soluble en frio, Bloom 0 a 70 g/l)

Después de tres días se centrifuga y se determinan los taninos del sobrenadante diluido 1:50 (C1) y se realiza la misma operación con el vino testigo (C0)

Con cubeta de 1 cm

 

I_gelatina= [(C0-C1)/C0]*100

 

 

 

Indice de etanol (Glories)

 

A 5 ml de vino se le añaden 45 ml de etanol.

Tras 48 horas, se diluye 1/10 con H2O destilada y se lee la absorbancia a 280 nm (D1)

A 1 ml de vino original se le añade 9 ml de etanol 95% y después se lleva hasta 100 ml con H2O destilada y se lee la absorbancia a 280 nm. (Do)

Con cubeta de 1 cm.

 

I_etanol=[(Do-D1)/Do]*100

 

Porcentaje de color de antocianos poliméricos (Somers modificado por Boulton)

 

acetaldehido 10% (vida media 4 semanas)

Metabisulfito potasico 3% (hacerla diariamente)

Buffer pH 3.6 - 24 ml de etanol con 176 ml de H20. Disolver 0.5 g de bitatrato potasico en la solución. Ajustar la solución a pH 3.6

 

Pipetear 100 ml de acetaldehido al 10% en 5 ml de vino. Tapar, mezclar y dejar durnate 45 minutos. Leer a 520 nm en una cubeta de 1 mm. Multiplicaar por 10.2 ESTO ES A.

Añadir 100 ml de metabisulfito potasico al 3% en 5 ml de vino. Tapar, mezclar y dejar durante 15 minutos. Leer a 520 nm en una cubeta de 1 mm. Multiplicar por 10.2 ESTO ES B.

A una cubeta de 1 cm conteniendo 1,9 ml de buffer, añadir 100 ml de vino. Dejar durante 10 minutos y leer a 520 nm. Multiplicar esta lectura por 20. ESTO ES C

 

 

% de color debido a la copigmentacion  A-C/A

% color debido a antocianos libres C-B/A

% color debido a pigmentos polimericos B/A

 

 

Determinación de los antocianos totales, de los flavonoides totales y flavonoides no antocianicos (taninos)

 

Principio del metodo:

El método se basa en el hecho de que a pH cercano a cero todos los antocianos se encuentran en su forma coloreada.

 

Reactivos:

Etanol-clorhidrico preparando una mezcla de etanol (95-98%), agua y acido clorhídrico concentrado (37%) respectivamente a razón de 70:30:1

Matraces de 20,25,50 cc

Cubetas de cuarzo apropiadas. 1cm

 

Determinación:

Se diluye el vino 50 veces en etanol clorhídrico.

Se espera 30 minutos a realizar la primera lectura.

 

Se lee la muestra a 230 y 700 nm.

 

Se determinan los siguientes puntos:

257 nm

280 nm

360 nm

540 nm

 

Antocianos tot (mg/l) = (ABS₅₄₀ + 0.02) x 20 x dil (expresado en malvina monoglucosida)

Los flavonoides totales se expresan en mg/l de catequina según el calculo:

Flavonoides totales (mg/l) = (ABS₂₈₀-ABS_{linea base 280}) x dil x 82.4

 

Siendo la linea base 280 la diferencia entre abs280 y el punto280 situado entre la linea creada entre Abs 257 y Abs360.

 

Los flavonoides no antocianicos son determinados em mg/l de catequina a través de la siguiente ecuación:

 

Taninos (mg/l) = (Abs280 – AbsLinea base 280) – (Abs540/3.5) x dil x 82.4

 

IPT280: Indice de polifenoles totales a 278 nm

 

 

Principio del metodo:

Observando una muestra de polifenoles al espectrofotómetro, vemos como aparece un espectro de absorción inconfundible, con dos máximos típicos a 215 y 278 nm, y con un mínimo entorno a 245 nm.

Solo el máximo a 278 es constante en todos los tipos de vino, y para clase de sustancias fenolicas.

A eso se refiere la determinación de los polifenoles totales mediante espectrometría por ultravioleta.

La absorbancia a 280 nm no esta influenciada por el pH de la disolución.

 

Reactivos:

(+) catequina

Etanol 95

Bureta 100 ml

Espectofotometro

Cubeta de cuarzo de 1 cm

 

Determinacion:

Vino tinto: 100-200 dilucion (Abs debe dar entre 0.2 y 0.5)

Vino blanco 20 dilucion (Abs debe dar entre 0.2 y 0.5)

Se lee directamente el vino diluido a 278 nm, en cubeta de cuarzo de 1 cm usando como control el agua destilada.

 

Expresion de los resultados:

como IPT (índice de polifenoles totales) a traves de la formula:

 

IPT280= Abs278 x dil

 

en mg de (+)catequina por litro usando una curva de calibración

 

Curva de calibracion:

Se pesan 100 mg de catequina y se llevan a 100 ml con etanol. Se obtienes asi 1 mg/ml.

Se cogen 10 ml y se llevan hasta 100 ml con H2o destilada en un matraz de 100 ml, obteniendo asi una disolucion de 0.1 mg/ml.

De esta ultima solución se prepara 5 ml (=0.5 mg), 10 ml (=1 mg), 15 ml (01.5 mg), 20 ml (=2 mg), y enrasando a 100 ml con H2O destilada.

Se hace la curva de calibración haciendo cero con un vino diluido 1:100 al que no se adiciona catequina.

A partir de eso se medirá la Abs278 haciendo el cero con H2O destilada.